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发布时间:2020-10-17 04:17:46
注意: 1、不建议将爬片泡酸后高压灭菌,首先玻片太薄高压容易使玻片变形,其次湿灭很容易使玻片上留下水渍影响细胞贴壁;
2、接细胞时控制合适的细胞量,避免收样时细胞量过度拥挤甚至打堆影响结果的观察。
真核细胞有许多***功能的膜结构组件,蛋白质活性和亚细胞***的动态调节是许多细胞过程的需要。光具有高空间及时间分辨率,被广泛用于外部触发生物调节。蛋白质可通过融合感光体获得光敏方向性,但这种耗时、复杂的***编辑过程可能会扰乱正常细胞通路,改变蛋白功能和行为。因此需要更小影响蛋白质功能的策略实现蛋白的准确控制。实验流程:实验细节沟通——订单/实验材料确认,签订合同——全***合成或者****(如果客户未提供测序完成的目标***)——实验设计——过表达载体构建——遗传转化/瞬时转化——激光共聚焦观察拍摄照片亚细胞***(后两步为可选项)。适配体具有优异的分子识别能力,并且方便修饰,设计灵活。本文中作者发展了基于适配体的光响应纳米平台,并选择转录因子RelA作为实验对象,一种适配体Apt可高结合活性、特异性识别RelA。
亚细胞***实验本质上,既然是荧光双染技术,蛋白质本身没有荧光,有多种办法使它带上荧光信号,一是GFP(绿色荧光蛋白)融合标记,二是免1疫荧光标记,通过带有荧光的抗1体直接或者间接识别蛋白。标记完成后在激光共聚焦显微镜下观察荧光信号的叠加情况,如果能与细胞器等Marker蛋白信号重叠则可说明目的蛋白***情况。蛋白组数据及基于的荧光成像技术,为人类细胞的亚细胞结构***提供了目前为止为的综合性数据。很多情况下用GFP(绿色荧光蛋白)融合标记目的蛋白,用荧光抗1体标记细胞器。
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