植物原位杂交技术服务择优推荐「多图」

武汉迈斯普生物科技有限公司是一家***从事生物***技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士领衔创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向***提供的生物技术服务。

荧光原位杂交技术是一种重要的非性原位杂交技术，原理是利用报告分子（如生物素、等）标记核酸探针，然后将探针与染色体或DNA纤维切片上的靶DNA杂交，若两者同源互补，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。样品固定是原位杂交中必不可少的步骤，从化学反应角度来看，固定剂的使用和选择对后续杂交的影响不会太大，因为核酸杂交的功能分子基团被安全地包裹在DNA双螺旋结构中，而交联剂的使用对RNA基本没有影响。此时可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的化学反应，经荧光检测体系在镜下对待DNA进行定性、定量或相对***分析

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然后分别铺筛选平板使细胞长成菌苔（lawn），再将两种菌苔复印到同一个三重筛选平板上，原则上只有诱饵和靶蛋白发生了相互作用的二倍体细胞才能在此平板上生长。单倍体细胞或虽然是二倍体细胞但BD融合蛋白和AD融合蛋白不相互作用的都被淘汰。长出来的进一步通过β-半乳糖苷酶活力进行鉴定。这项改进不仅简化了实验操作，而且也提高了双杂交的筛选效率。***组原位杂交技术是以亲本之一的总***组DNA做探针，另一亲本的***组DNA做封阻，在荧光原位杂交的基础上发展起来的一种染色体/染色质检测技术。

良好的前期标本制备十分重要，这点对于采用秋水仙素刺激得到中期染色体分裂象尤为重要。刺激时间过短或过长都会影响实验观察，因此需要耐心摸索作用时间。

蛋白酶K的作用浓度。浓度高了极易影响细胞核形态，造成模糊不清，浓度低了则探针不易进入细胞核，杂交率大大降低。石蜡切片一般要达到10-30min，不要超过半小时，一般来说，20g/L蛋白酶K在50℃下消化20min足矣。

原位杂交在前。

（1）常规脱蜡入水。

（2）37℃蛋白酶K消化20min，37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。

（3）滴加探针，加盖玻片，避光、湿盒、37℃过夜孵育。

（4）如果***盒允许的话，将***盒中洗脱液水浴加温至37℃震荡洗脱多余的探针。

（5）加碱性磷酸酶标记的抗1体，37℃孵育半小时，洗去抗1体后显色。

免1疫组化在后。

（1）将显色后确认为阳性的切片充分漂洗。

（2）在PH为6.0的枸橼酸钠溶液中，微波至96℃左右，作用10min。

（3）滴加一抗，37℃湿盒孵育2h。

（4）充分漂洗切片，滴加二抗，室温下孵育40-50min。

（5）DAB显色后，采用PBS中止显色反应。

（6）不要复染核，不然就盖住原位杂交信号了。