酵母双杂交技术服务价格常用指南

武汉迈斯普生物科技有限公司是一家***从事生物***技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。荧光原位杂交技术是一种重要的非性原位杂交技术，原理是利用报告分子（如生物素、等）标记核酸探针，然后将探针与染色体或DNA纤维切片上的靶DNA杂交，若两者同源互补，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士领衔创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向***提供的生物技术服务。

原位杂交可分为：ISH、Fish、Gish等实验类型。具体实验时，根据不同的实验目的选择不同的探针。在研究植物目的***时空表达及分布时，我们常采用XX辛标记的探针来做植物原位杂交。XX辛标记的探针特异性强、灵敏度高，封片后可以长期保存观察。非常适合用来做植物***的原位杂交。

武汉迈斯普生物科技有限公司是一家***从事生物***技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。⑥分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传病***携带者的确定，某些的诊断和生物学剂量测定等。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士领衔创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向***提供的生物技术服务。

在双杂交鉴定过程中要经过两次转化，这个工作量是相当大的，特别是寻找新的作用蛋白质的时候尤其如此。而且，酵母细胞的转化效率比***要低约4个数量级。因此转化步骤就成为双杂交技术的瓶颈。Bendixen等人通过酵母接合型的引用，避免了两次转化操作，同时又提高了双杂交的效率。

杂交条件一般是37℃避光湿盒过夜。至少温度要严格控制在37-40℃，过高或者过低都是不适合的。孵育时间也不要无限延长，一般18-20h就肯定够了，时间过久会造成自动解链，造成信号降低。

漂洗液的温度控制。很多人都觉得这个无所谓。小编个人认为FISH实验是一个对温度非常敏感的实验。保证漂洗液温度为37℃而不是室温，可能对于整个实验有比较良好的影响。

原位杂交在前。

（1）常规脱蜡入水。

（2）37℃蛋白酶K消化20min，37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。

（3）滴加探针，加盖玻片，避光、湿盒、37℃过夜孵育。

（4）如果***盒允许的话，将***盒中洗脱液水浴加温至37℃震荡洗脱多余的探针。

（5）加碱性磷酸酶标记的抗1体，37℃孵育半小时，洗去抗1体后显色。

免1疫组化在后。

（1）将显色后确认为阳性的切片充分漂洗。

（2）在PH为6.0的枸橼酸钠溶液中，微波至96℃左右，作用10min。

（3）滴加一抗，37℃湿盒孵育2h。

（4）充分漂洗切片，滴加二抗，室温下孵育40-50min。

（5）DAB显色后，采用PBS中止显色反应。

（6）不要复染核，不然就盖住原位杂交信号了。