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发布时间:2020-07-18 20:20:44
作为一种可视化特定DNA序列的分子细胞遗传学技术,荧光原位杂交技术目前被广泛应用于染色体畸变。如非整倍体、染色体重组。其基本流程包括探针标记、探针的变性、样本变性、杂交和荧光信号采集。荧光原位杂交技术在***定性、定量,整合、表达等方面的研究中颇具优势,目前已经被广泛应用于遗传病诊断、病毒分析、产前诊断、遗传学和***组研究等许多领域,在临床检验、教学和研究等方面扮演着重要的角色。
去垢剂处理:如果对样品的固定、脱水、包埋等预处理过程不足以将脂膜成分***暴露核酸,可对样品进行额外的蛋白去垢剂处理(如Triton X-100和SDS)。
石蜡切片的FISH要点
(1)***固定,采用PH7.2的10%甲醛固定24h是比较适合的,PH很重要。较厚的***块建议切开后再固定。这一点小编已经反复提过很多次了。良好的固定是所有病理实验的前提。
(2)对于石蜡切片来说,采用蛋白酶K作为消化液是更优的选择。消化条件20g/L蛋白酶K在50℃下消化20min。胃蛋白酶是极易失活的,失活了就没法充分消化,消化过度又会使细胞核变模糊。综合来看,小编更推荐蛋白酶K。
(3)石蜡切片的杂交温度一般都是37摄氏度。而杂交时间则需要摸索才能得到更佳时间。不过,一般的过夜孵育基本可以达到目的。
(4)FISH实验中非特异性着色是个难以避免的问题,我们能做的就是尽量减少背景。具体可作为的地方:充分严格漂洗、全程避免干片、探针浓度不宜太高、杂交温度要控制在37℃。
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