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发布时间:2020-07-13 03:55:48
原理:构建编码目bai标蛋白和荧光蛋du白的融合蛋白的载体,转染细胞,表zhi达,然后激光共聚焦显微镜dao观察荧光信号所在位置,即可知道该蛋白的亚细胞***。注意做空载荧光蛋白的对照。
具体步骤:构建目标蛋白与GFP的融合蛋白的瞬时表达载体,***枪轰击洋葱内表皮细胞,或化学(PEG)转化原生质体,瞬时表达后用荧光显微镜观察荧光位置,当然激光共聚焦图片会更漂亮。
研究者首先通过荧光成像技术来定义细胞器和亚细胞区的蛋白质组信息。通过测定30个亚细胞结构的蛋白***,在细胞图谱中定义了13个亚细胞蛋白质组以及分泌蛋白质的蛋白质组,通过荧光显微镜在细胞图谱中注释的亚细胞结构。研究人员以蛋白质图谱中的蛋白空间信息对蛋白的互作关系进行验证(图5)。结果表明,在质膜上的蛋白拥有更多的机会与质膜、高尔基体、囊泡、黏着斑、细胞接头及细胞溶质中的蛋白发生直接的互作关系。
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