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发布时间:2020-07-09 07:15:17
1)将融合***(待测植物蛋白质***-报告***)***到植物表达载体,得到重组表达载体;2)将重组表达载体转化农,得到重组农;3)向重组农中加入农侵染缓冲液,调节OD600为0.1~0.3,20-25℃静置1-2h,得到侵染菌液;4)用针头在植物叶片上避开叶脉扎孔,用无针头将侵染菌液从扎孔处***至植物叶片内;5)培养植物2天,从***部位取1-2cm2叶片;根据报告***检测待测植物蛋白质在植物中的亚细胞***。亚细胞***要研究蛋白质的细胞***,是在外面完成的一种实验,不能再体内蛋白质细胞中完成,所以,研究的成本比较高,对***知识的要求比较高。实验证明,本方法具操作简单、快速、标记效果好、重复性好的优点;还可用于***表达调控及内含子功能研究等,对研究新***功能和表达调控奠定了技术基础。
蛋白亚细胞***主要有两种方法,一种是结果准确但费时费力的实验验证方法,如荧光蛋白标记与Western/SDS-PAGE等;第二种方法是通过生物信息学手段,借助计算机对蛋白的亚细胞***信息进行预测,这种方法可以在短时间获得大量蛋白的预测信息,而我们今天介绍的是便是第二种方法。而在对细胞内不同隔室间信号传递的分析中发现,大型细胞隔室的作用非常突出,特别是跟分泌途径相关,或者不同隔室之间信号传递有关。目前常用的亚细胞***分析软件主要采用三种分析策略:N端排序或信号分子序列分析;氨基酸序列组成分析;结合多种策略(N端信号序列,氨基酸序列组成,功能域,相似度,GO分类)的分析。
通过对目的蛋白的标记,例如融合绿色荧光蛋白GFP,使用扫描共聚焦显微镜激发荧光,从而对蛋白的表达分布予以确认。实验流程:实验细节沟通——订单/实验材料确认,签订合同——全***合成或者****(如果客户未提供测序完成的目标***)——实验设计——过表达载体构建——遗传转化/瞬时转化——激光共聚焦观察拍摄照片亚细胞***(后两步为可选项)。依据对亚细胞分布的准确度不同,亚细胞***的实验设计也分成简化型亚细胞***分析和内参型共***分析。对于植物蛋白的亚细胞***分析,主要通过构建融合荧光蛋白的过表达质粒,转化烟1草和原生质体瞬时表达体系确定其***及共***情况。
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